Застосування Regenera Activa при трансплантації волосся

Анотація

Різні дослідження показують необхідність використання незрілих жирових клітин, щоб індукувати проліферацію балджа стовбурових клітин для стимуляції анагенной фази росту волосся. Крім того, з жирової тканини стовбурових клітин, клітин-попередників жирової тканини і фактори росту, секретуються зрілих адипоцитів можуть допомогти загоєнню ран і судинної регенерації. В даний час, ніхто не знає жоден протокол про регенерацію тканин, застосовуваний до трансплантації волосся, особливо спрямовані на реконструкцію головної судинної мережі з метою приживлення пересаджених волосся і процесу загоєння. Метою роботи є дослідження, як застосування аутологічної клітинної суспензії, отриманої за допомогою методу Regenera, за допомогою механічної процедури фрагментації, яка дозволяє отримати фізіологічний розчин, що складається з гетерогенного пулу клітин,
багатих жировими мезенхімальних стовбуровими клітинами і факторомі зростання, допомагає загоєнню ран і приживлення пересадженог волосся. Під час операції відновлення волосся, жирову тканину витягують з прес-залишку фолікулярної нарізки, обробленої з використанням системи Regenera. Отриману клітинну суспензію наносили в області трансплантації волосся, збільшуючи природний фонлініі адіпоцітові, підвищуючи кількість факторів росту. Крім того, клітинна суспензія була застосована до шву на потиличній області. Клітинна популяція характеризується проточною цитометрією (FASC). Щомісячна оцінка з пересадки волосся, відстежувана за допомогою фотографій і вражень пацієнта, свідчить про те, що є прискорення загоєння мікро-ран і безперервне зростання пересадженого волосся навіть через два місяці після процедури, з скороченням неактивної фази. На закінчення, цей новий підхід спрямований на інтеграцію регенеративної медицини і операції по відновленню волосся з метою поліпшення результатів для пацієнта. Було б чудово продовжити це дослідження, щоб детальніше розробити причини на молекулярному рівні цього задовільного клінічного дослідження.

1. Історія питання

Область трансплантації волосся зробила величезний крок вперед, і тепер можна отримати результати, які навіть не можливо було собі уявити тридцять років тому.

За останні десять років ми були свідками підйому регенеративної медицини, що застосовується в багатьох хірургічних дисциплінах, спрямованих на підвищення результатів і зменшення болю пацієнтів. В даний час, крім плазми, збагаченої тромбоцитами (PRP), ніхто не знає жоден протокол застосування регенерації тканин для трансплантації волосся, особливо процедури, спрямовані на реконструкцію головної судинної мережі з метою приживлення пересадженого волосся і процесу загоєння.

Ряд досліджень підкреслюють наявність клітин в тілі дорослої людини, здатних відновлювати і регенерувати пошкоджені тканини.

Жирова тканина є багатофункціональним орган, який містить різні клітинні типи, такі як зрілі адипоцити і стромальні судинні фракції (SVF), яка складається з ендотеліальних клітин, перицитів, фібробластів, преадіпоціти і мезенхімальних стовбурових клітин, які називаються жирові стовбурові клітини (ADSC) (Малюнок 1). Ці плюрипотентні клітини з їх секрецією опосередковують різні шкірні регенеративні ефекти, такі як загоєння ран, антиоксидантний захист і попереджають появу зморшок. Аутологічні жирові стовбурові клітини були застосовані для декількох регенеративних методів лікування, таких як широко поширені травматичні дефекти зводу кісток черепа, нагрудних Аугментація, свищів у хворих з хворобою Крона і для загоєння ран при лікуванні хронічних виразок. Фесту показує необхідність незрілим адипоцитам сприяти поширенню опуклості стовбурових клітин. Сумікава показує потенціал лептину та адіпокіни як індуктора фази анагена. Крім того, фактори росту стимулюють ріст волосся і exvivo і invivo на моделі тварини.

Очевидно, що походження адипоцитів має вирішальне значення для регенерації тканин і росту волосся.

2. Мета

Метою даної роботи є оцінка того, як пул клітин, що складаються з жирових стовбурових клітин, перицитів, ендотеліоцитів, преадіпоціти і їх секреції, може поліпшити результат операції з пересадки волосся, допомагаючи загоєнню ран і приживлення фолікулярних об’єднань.

3. Методи

3.1. Об’єкти

У трьох пацієнтів, підданих операції відновлення волосся із застосуванням отриманих з жирової тканини стовбурових клітин і факторів росту, піддавалися контролю через 5 днів, 2 тижні і через 1 міс. Відбір пацієнтів був випадковим і в залежності від їх можливості взяти участь.

3.2. Отримання клітинної суспензії

Під час операції відновлення волосся, вирізається смужка шкіри голови з потиличної області і подрібнюється для ізолювання фолікулярних об’єднань. Під нижнім шаром дерми є гиподерма і жирова тканина, які раніше не були використані. Ці тканини були оброблені з використанням методу Regenera

Пристрій Regenera є безпечною стандартизованої системою підготовки проб для автоматизованої механічної дезагрегації популяцій клітин. Це механічне дроблення дозволяє витягти з тканини тільки найдрібніші клітини, які представляють клітини-попередники, відповідальні за формування тканини. Крім того, ця система здатна подрібнювати, без пошкодження, поодинокі компоненти позаклітинного матриксу, які відіграють важливу роль у зменшенні запального процесу і, таким чином, допомагають загоєнню тканин. Малюнок 2 показує всі кроки отримання клітинної суспензії.

4. Проточна цитометрия (FACS)

Аналіз проточної цитометрії (FACS) проводили для оцінки кількості та якості клітинної суспензії двох різних пацієнтів.

Стробування було зроблено для CD146 і CD34, зазвичай, з жирової тканини мезенхімальних стовбурових клітин. Клітини також спостерігали в оптичному мікроскопі.

5. Результати

5.1. Аналіз клітинної суспензії

Клітинна життєздатність складає 93% для 1-го пацієнта і 74% для 2-го. Це хороший результат, особливо після механічної фрагментації

Обидва стробирования для CD146 і CD34 показують, що клітинна суспензія, отримана за допомогою Regenera, являє собою гетерогенний пул клітин, що складаються з еритроцитів, епітеліальних клітин, жирових стовбурових клітин (ADSC) і 90% живих клітин, які відповідають незрілим адипоцитам і жировим стовбуровим клітинам (ADSC) на стадії першої диференційовки (малюнок 3).

Клітини знаходяться в активній фазі клітинного циклу, багато з них подвоюються і розщеплюються, показуючи, що сортування Regenera дозволяє збирати молоді та активні клітини, відкидаючи неактивні і старі клітини в кінці їх функціональної корисності (Малюнок 4).

5.2. Подальше спостереження за пацієнтом

Уже через два тижні після трансплантації було завершено загоєння мікрорани. Волосся продовжували зростати, значно покращуючи настрій пацієнта і впевненість в собі. Крім того, рана донорської області повністю зажила (малюнок 5).

Через п’ять днів після операції з трансплантації волосся, пацієнт повідомив про повне відновлення, без будь-яких припухлостей і набряків. Дрібні струпи були чистими і сухими, готові відпасти (малюнок 6).

Через місяць після операції, було помітно приживлення пересадженого волосся і прекрасне загоєння мікро ран (малюнок 7)

5.3. Враження пацієнта

Для всіх пацієнтів біль була дуже м’якою, а для одного з них повністю була відсутня.

Вони також повідомили про скорочення пост операційного набряку і припухлості. Сприйняття болю було встановлено за допомогою візуальної аналогової шкали (VAS) (Малюнок 8).

6. Обговорення

Система Regenera дає можливість брати з тканини тільки найменші клітини, які являють собою клітини-попередники, відповідальні за формування тканини. Це дозволяє скоротити, без втрат, поодинокі компоненти позаклітинного матриксу, які відіграють важливу роль у зменшенні запального процесу і таким чином допомогти загоєнню тканин. Крім того, вона розбиває зрілі адипоцити, звільняючи багато чинників зростання. Таким чином, можна підтримувати свого роду “клітинну нішу”, в якій кожна клітина і фактор росту відіграє свою роль в тканинної регенерації.

Застосування цих клітин в області трансплантації волосся збільшує природний фон лінії адипоцитів, яка вже присутня в області балджа і дермальних волосяних сосочках. Це підвищує кількість факторів росту, полегшуючи процес загоєння і допомагаючи росту волосся і приживлення пересадженого волосся. Було б чудово продовжувати це дослідження, розробити на молекулярному рівні причини цих задовільних клінічних результатів і провести більш повне клінічне дослідження.

Малюнок 1. Жирова тканина і фото жирових стовбурових клітин (ADSC) за допомогою оптичного мікроскопа.

Малюнок 2. Система Regenera: 1) Гіпо- дерма і жирова тканина з потиличної області; 2) Система Regenera: шматок тканини +1 мл фізіологічного розчину був введений в Regeneracons (CE / EC одноразові медичні пристрої, що містять сітку з нержавіючої сталі з 100 шестикутними отворами 50 мкм, кожен з яких оточений шістьма мікро лезами) і механічно фрагментований за допомогою Regenera протягом 3 хв. Клітини пропускаються через сітку і перетворюються в рідку суспензію; 3) клітинну суспензію вибирали за допомогою шприца. Результати дезагрегации і фільтрації в фізіологічному розчині, що складається з гетерогенного пулу клітин і факторів росту; 4) клітинну суспензію вводили підшкірно; і 5) введення в мікро надрізи, зроблені для пересадки волосся. Суспензію наносили до і після введення волосся. (Для деяких пацієнтів суспензія застосовувалася також на рану донорської області).

Малюнок 3. Проточная цитометрия (FACS), зроблена на пулі клітин, отриманих з механічною фрагментацією підшкірної і жирової тканини з потиличної області у двох пацієнтів. 1) Життєздатність клітин; 2) Стробування для CD146 і CD34, щоб підкреслити наявність жирових мезенхімальних стовбурових клітин (ADSC).

Малюнок 4. Фотографії клітинної суспензії двох пацієнтів за допомогою оптичного мікроскопа.

Малюнок 5. Пацієнт 1. (а) Відразу після операції відновлення волосся; (B) і (с) через два тижні після.

Малюнок 6. Пацієнт 2. (а) Відразу ж після операції відновлення волосся; (B) Через п’ять днів після.

Малюнок 7. Пацієнт 3. (а) Відразу після операції відновлення волосся; (B) Один місяць тому.

Рисунок 8. Визуальная аналоговая шкала(VAS) показывает боль, перенесенную пациентами: от 0 до 2 боль была очень мягкая, от 2 до 4 слабая, от 4 до 6 средняя, от 6 до 8 сильная, от 8 до 10 очень сильная.